30%的磷酸水溶液，通过与酸反应和强力表面活性剂/洗涤剂的协同作用，展现出对不锈钢及其他湿润部件的高效清洁能力。相较于传统的硝酸“钝化”处理，该方法在清洁效果上更为显著，且对材料的损伤程度更低，特别是对于低紫外波长日常应用环境下的部件。值得注意的是，此磷酸清洗步骤并非直接用于钝化，而是作为系统钝化前清洁的重要首步。

    一般而言，在离子色谱分析中对阳离子的检测，或是除配备氧化方式的电化学检测器外的其他应用，通常不需要实施完整的钝化系统。考虑到真空脱气机的存在（每个通道体积为8mL），在某些情况下，磷酸并非必须用于全部通道的清洗。然而，若计划对所有四个通道使用磷酸清洗，推荐采用湿灌注方式，以4mL/min的流速对每个通道进行8至10分钟的清洗，以确保脱气机的彻底清洁。完成此步骤后，强烈建议对管路进行彻底冲洗，至少使用清水冲洗2至3次，以确保从溶剂过滤头等关键部件中彻底清除磷酸残留。

01 — 酸钝化

    HPLC系统内部可能面临的污染物多种多样，包括人为触摸、实验室化学环境暴露、零部件制造残留，以及先前流动相和样品的残留物。虽然流动相可以逐步清洗系统，但某些释放的杂质会附着在色谱柱和检测器湿润表面，进而影响系统整体性能。

磷酸清洗：

    磷酸清洗是有效去除系统中有机杂质的方法。其洗涤作用似乎比强有机溶剂更为高效和迅速。这一步骤应在硝酸钝化之前进行。

硝酸钝化：

    硝酸钝化主要是通过在不锈钢表面形成一层均匀的氧化层，保护其免受腐蚀（如卤化物、螯合剂等），并减少金属离子进入流动相。

需进行磷酸清洗和硝酸钝化的应用：

    所有氨基酸分析系统

    配备电化学检测器的系统

    分析无机阳离子，包括过渡金属的系统

    利用柱后添加衍生试剂或络合样品组分的系统

    仅需进行磷酸清洗的应用：

    在低pH和低紫外检测波长下运行的常规HPLC系统

    需要高灵敏度性能的梯度紫外检测系统

系统清洗指南：

    执行清洗步骤时，请务必采取适当的安全防护措施。开始前，请取下色谱柱，用两通或接头替代。建议选择254nm作为监测的紫外波长。同时，请通过软件或移除电缆的方式取消紫外检测器的自动回零功能。

02 — 冲洗步骤

    1.甲醇冲洗：

    使用甲醇彻底冲洗HPLC系统，确保泵的所有管路都等比例地流过甲醇。

    2.水冲洗：

    使用纯水以同样的方式冲洗系统，确保所有管路都被水彻底清洗。

    3.磷酸水溶液冲洗：

    导入约30% v/v的磷酸水溶液，并以1mL/min的流速冲洗系统约一个小时。 在此过程中，确保活动所有的阀门，如参比阀、进样阀和旁路阀等，以充分清洗整个系统。

    4.重复或跳过硝酸冲洗：

    如果需要，重复水冲洗步骤，并考虑使用6N硝酸(HNO₃)进行进一步的清洗。 除非绝对必要，建议跳过硝酸钝化步骤，因为硝酸是强紫外吸收溶液。 若选择跳过，直接进行第7步。

    5.硝酸水溶液冲洗（若需要）：

    如果选择使用硝酸，导入约40%的6N硝酸水溶液，并以1mL/min的流速冲洗系统约一个小时。

    6.再次水冲洗并检查：

    使用纯水再次彻底冲洗系统，并仔细检查是否有任何渗漏。 在冲洗过程中，持续活动所有阀门，以确保系统被彻底清洗。 如果计划使用低于270nm的紫外波长进行检测，请特别注意增加水冲洗的次数和新鲜度，以去除系统中的所有痕量硝酸根离子。 硝酸清洗后，可能需要几天时间才能观察到在低紫外波长下的基线稳定。持续换水并保持耐心是关键。

    7.恢复实验溶剂冲洗：

    返回到甲醇冲洗阶段，然后用实验所需的溶剂继续冲洗系统。

    8.恢复紫外检测器功能：

    通过软件或接上电缆的方式，重新启用紫外检测器的自动回零功能。

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